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時(shí)間分辨熒光微球(羧基)偶聯(lián)使用方法

簡(jiǎn)要描述:時(shí)間分辨熒光微球(羧基)偶聯(lián)使用方法微球的活化
各稱取 20mg NHS 和 EDC,用標(biāo)記緩沖液溶解,現(xiàn)用現(xiàn)配,即 20mg/ml NHS 和 EDC; 取 20ul NHS,加入到清洗后的微球中,快速混勻;
然后再取 5ul EDC 加入到微球中,快速混勻; 室溫孵育,20-30min。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2021-12-14
  • 訪  問  量:2261
詳情介紹

時(shí)間分辨微球(羧基)偶聯(lián)方法

粒徑: 100nm-300nm

激發(fā)/發(fā)射:365/610nm

.  時(shí)間分辨熒光微球(羧基)偶聯(lián)使用方法微球的清洗

一般取 1mg 微球(10mg/ml) 標(biāo)記 0.1mg 抗體,不同項(xiàng)目可進(jìn)行兩邊濃度摸索優(yōu)化。

具體操作流程如下:

1.100ul 微球 + 900 ul 標(biāo)記緩沖液50mM MES,pH 6.0或者0.05MPBS,pH 6.0

2.17000rpm,離心 20min,第一遍;

3.去掉上清,用 1000ul 標(biāo)記緩沖液重懸微球;

4.17000rpm,離心 20min,第二遍;

5.去掉上清,用 1000ul 標(biāo)記緩沖液重懸微球離心后微球重懸可使用水浴超聲儀,建議功率 500-700W,超聲時(shí)長(zhǎng) 2-5min,下同,備用。

.  時(shí)間分辨熒光微球(羧基)偶聯(lián)使用方法微球的活化

各稱取 20mg NHS  EDC,用標(biāo)記緩沖液溶解,現(xiàn)用現(xiàn)配,即 20mg/ml NHS  EDC; 20ul NHS,加入到清洗后的微球中,快速混勻;

然后再取 5ul EDC 加入到微球中,快速混勻; 室溫孵育,20-30min。

.  清洗去除殘留 EDC將活化后的微球:

1.17000rpm,離心 20min,第一遍;

2.去掉上清,用 1000ul 標(biāo)記緩沖液重懸微球;

3.17000rpm,離心 20min,第二遍;

4.去掉上清,用 1000ul 標(biāo)記緩沖液重懸微球,備用。

IV.  微球與抗體的偶聯(lián)

0.1mg 抗體溶解于50mM MES,pH 8.5或者0.05MPBS,pH 8.5 2ml 離心管中,加入活化后的微球,快速混勻后,室溫孵育,3 小時(shí)。

.  封閉

配制 20mg/ml  BSA,即稱取 20mg BSA,用終濃度 100mM 乙醇胺溶液充分溶解,備用。

微球標(biāo)記抗體后,加入 100ul 上述封閉液 BSA,室溫孵育 1 小時(shí)。 .  去除未結(jié)合的抗體

此步驟目的是通過高速離心的方法去除游離的未結(jié)合微球的抗體;

具體流程如下:

1.17000rpm,離心 20min,第一遍;

2.去掉上清,用 1000ul 稀釋液50mM PBS,pH 7.4  50mM Tris,pH 8.0)重懸微球;

3.17000rpm,離心 20min,第二遍;

4.去掉上清,用 1000ul 稀釋液重懸微球,即為抗體-微球標(biāo)記復(fù)合物,4℃放置備用, 如長(zhǎng)期保存需加入終濃度為 0.2% BSA 和 0.02% NaN3 溶液。

 

注意事項(xiàng)

1. 保存條件:本產(chǎn)品需要于 2-8℃保存,切勿冷凍;

2. 本產(chǎn)品在使用前確認(rèn)處于均勻的懸浮狀態(tài),有輕微結(jié)塊可以用超聲去除;

3. 本產(chǎn)品活化后建議立即進(jìn)行偶聯(lián)實(shí)驗(yàn),活化狀態(tài)不宜長(zhǎng)時(shí)間保存;

4. 本產(chǎn)品僅供科研使用。


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