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細(xì)胞和組織RNA核酸免提取試劑盒

簡(jiǎn)要描述:細(xì)胞和組織RNA核酸免提取試劑盒

試劑盒應(yīng)用
本試劑盒采用zhuan利裂解液配方在10分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織樣本的裂解、提取和純化。無(wú)需使用蛋白酶K、無(wú)需低溫離心。該配方中含有RNA保護(hù)劑,能夠抑制RNA降解、保護(hù)RNA完整,從而提高RNA產(chǎn)量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫(kù)構(gòu)建等。
本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2023-04-27
  • 訪  問  量:794
詳情介紹

細(xì)胞和組織RNA核酸免提取試劑盒

 

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒采用zhuan利裂解液配方在10分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織樣本的裂解、提取和純化無(wú)需使用蛋白酶K、無(wú)需低溫離心。該配方中含有RNA保護(hù)劑,能夠抑制RNA降解、保護(hù)RNA完整,從而提高RNA產(chǎn)量。提取RNA可用于RT-PCRRT-qPCRNorthern Blot、分子克隆、文庫(kù)構(gòu)建等。

本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

 

試劑盒組成

組分

Col-R010150T

編號(hào)

裂解液C

35 mL

Col-R0101A

洗滌液CW1

25 mL

Col-R0101B

洗滌液CW2

12 mL

Col-R0101C

洗脫液C

5 mL


RNA吸附柱

50

Col-R0101E

備注:第一次使用前,在洗滌液CW2中加入48mL無(wú)水乙醇,并標(biāo)記"和時(shí)間,避免重復(fù)加入。

 

保存條件

室溫保存一年

 

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無(wú)水乙醇、1.5mL無(wú)RNase離心管、DNase I2U/μL,或貨號(hào)QR0102

 

使用方法

1. 樣本處理

1.1 從動(dòng)物組織中提取RNA

1.1.1 20-100mg樣本放入液氮中充分研磨,加入700μL裂解液C顛倒混勻

或者20-100mg樣本加入700μL裂解液C,加入1顆鋼珠,放入組織研磨器中,研磨1-2分鐘。

備注:不同樣本中RNA含量差異很大,過多使用樣本容易導(dǎo)致堵塞,最終導(dǎo)致RNA提取量下降。

1.1.2 55℃孵育1分鐘。

1.1.3 12,000rpm離心1分鐘,取500μL上清。

1.1.4 加入250μL無(wú)水乙醇,充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

 

1.2 從懸浮細(xì)胞中提取RNA

1.2.1 細(xì)胞1,000rpm離心5分鐘,收集細(xì)胞沉淀。

1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106個(gè)時(shí),加入500μL裂解液C。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107個(gè)時(shí),加入700μL裂解液C。輕輕吹打混勻。55℃孵育1分鐘。

1.2.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量<5×106個(gè)時(shí),450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107個(gè)時(shí),650μL上清。

1.2.5 加入0.5倍體積無(wú)水乙醇,充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

 

1.3 從貼壁細(xì)胞中提取RNA

1.3.1 yimei消化細(xì)胞后1,000rpm離心5分鐘,收集細(xì)胞沉淀。

1.3.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106個(gè)時(shí),加入500μL裂解液C。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107個(gè)時(shí),加入700μL裂解液C。輕輕吹打混勻。55℃孵育1分鐘。

1.3.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量<5×106個(gè)時(shí),450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107個(gè)時(shí),650μL上清。

1.2.5 加入0.5倍體積無(wú)水乙醇,充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

 

2. RNA純化

2.1全部加入RNA吸附柱中,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中廢液。

2.2 RNA吸附柱中加入500μL洗滌液CW112,000rpm離心30秒,倒掉收集管中廢液。

2.3 RNA吸附柱中加入500μL洗滌液CW212,000rpm離心30秒,倒掉收集管中廢液。

2.4 重復(fù)步驟2.3一次。

2.5 12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中廢液。

2.6 RNA吸附柱放入新1.5mL無(wú)RNase離心管中,加入30-50μL洗脫液C,室溫放置1分鐘。

2.7 12,000rpm離心2分鐘,得到RNA溶液,-80℃保存。

 

注意事項(xiàng)

1. 務(wù)必在超凈臺(tái)中進(jìn)行操作,常換手套,防止RNA降解。

2. 盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取。

3. 使用無(wú)DNase無(wú)RNase的吸頭和離心管,防止RNA降解,常更換吸頭,防止交叉污染。

4. 為了提高洗脫效率,可提前將洗脫液C置于65℃水浴后再使用。

5. 根據(jù)后續(xù)試驗(yàn)需求,請(qǐng)使用DNase I(貨號(hào)QR0102)進(jìn)行基因組清除。

 

常見問題解析

問題

可能原因

推薦解決方案

RNA吸附柱

堵塞

(1)上樣量太高

(2)加入RNA吸附柱的液體中有固體成分或沉淀物

(1)減少上樣量。

(2)增加離心時(shí)間。

(3)切勿吸取到可見固體成分。

(4)再次離心。

RNA得率低

(1)未離心下來(lái)

(2)樣本量太大,裂解不充分

(1)減少樣本量。

(2)重復(fù)洗脫步驟一次。

RNA降解

(1)樣本不新鮮

(2)RNA酶污染

(1)使用新鮮樣本。

(2)使用保存在樣品保存液中樣本。

(3)樣本保存在-80℃甚至液氮中,盡可能現(xiàn)取現(xiàn)用。

(4)常更換手套。

(5)常更換吸頭和離心管。

(6)使用無(wú)DNase無(wú)RNase的吸頭和離心管。

 


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