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淺析黃曲霉毒素免疫親和柱的提取步驟和凈化步驟

 更新時(shí)間:2019-06-21    點(diǎn)擊量:5050
 1、黃曲霉毒素免疫親和柱的適用范圍:  
    適合于陳皮、胖大海、僵蠶、酸棗仁、桃仁等中藥材品種。*執(zhí)行2010版中國藥典附錄IXV黃曲霉毒素測定法進(jìn)行檢測。  
2、黃曲霉毒素免疫親和柱的提取步驟:  
    取供試品粉末約15.0g(過二號(hào)篩),精密稱定,加入氯化鈉3.0g,置于均質(zhì)瓶中,精密加入70%甲醇溶液75.0mL,高速攪拌2分鐘(攪拌速度大于11,000轉(zhuǎn)/分),離心5分鐘(離心速度2500轉(zhuǎn)/分),定性濾紙過濾、然后精密量取上清液15.0mL,置50ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,量取續(xù)濾液20.0mL,待凈化。  
    混合對照品溶液的制備:精密量取黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)品(黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標(biāo)示濃度分別為1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,作為儲(chǔ)備液。  
3、黃曲霉毒素免疫親和柱的凈化步驟:    
    1)回溫解凍:提前半個(gè)小時(shí)將黃曲霉毒素免疫親和柱從冰箱拿出常溫解凍;  
    2)上樣:準(zhǔn)確移取20mL提取好的樣品溶液注入免疫親和柱,使溶液以1滴/S的速度通過免疫親和柱,直至2mL-3mL空氣通過柱體,棄去流出液;  
    3)淋洗:用20mL水淋洗免疫親和柱,流速為1滴/s--2滴/s,淋洗兩次。直至空氣進(jìn)入免疫親和柱,直至2mL-3mL空氣通過柱體,棄去全部的流出液,抽干小柱;  
    4)洗脫:準(zhǔn)確加入1.0mL甲醇洗脫,流速約為1滴/s,收集全部的洗脫液于干凈的離心管中,用甲醇-乙腈-水(40:18:42)定容至2mL,供液相色譜測定。  
 
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